液相色譜（HPLC）分析中，流動相及管路內(nèi)的氣泡是影響檢測準(zhǔn)確性、儀器穩(wěn)定性的常見問題。氣泡的存在會導(dǎo)致基線漂移、峰形畸變、保留時間波動，嚴(yán)重時還會損壞泵體密封件、堵塞色譜柱，干擾定量分析結(jié)果。因此，及時有效的脫氣處理是HPLC分析前及運(yùn)行中的關(guān)鍵操作。本文結(jié)合儀器結(jié)構(gòu)與實(shí)際應(yīng)用，詳細(xì)介紹氣泡產(chǎn)生的原因及各類脫氣方法的操作要點(diǎn)、適用場景。
一、氣泡產(chǎn)生的主要原因
HPLC系統(tǒng)中的氣泡主要來源于流動相本身、系統(tǒng)泄漏及操作不當(dāng)。流動相在制備過程中會溶解空氣中的氧氣、氮?dú)獾葰怏w，溫度升高、壓力降低時，氣體溶解度下降，便會析出形成氣泡；系統(tǒng)管路接頭松動、泵密封磨損等泄漏問題，會使空氣進(jìn)入管路；此外，流動相混合時的攪動、樣品進(jìn)樣過程中帶入的空氣，也會導(dǎo)致氣泡產(chǎn)生。不同來源的氣泡在系統(tǒng)中分布不同，需針對性選擇脫氣方法。
二、常用脫氣方法及操作規(guī)范
（一）超聲脫氣法
超聲脫氣是實(shí)驗(yàn)室離線脫氣方法，具有操作簡便、成本低、適用范圍廣的特點(diǎn)。其原理是利用超聲波的空化效應(yīng)，使流動相中的氣泡破裂并逸出液面，同時加速氣體擴(kuò)散，達(dá)到脫氣目的。
操作步驟：將配制好的流動相裝入密封容器中，液面距容器口1-2cm，避免脫氣時液體飛濺；將容器放入超聲波清洗儀，確保液面高于超聲探頭位置，開啟超聲儀，功率設(shè)置為80-120W，脫氣時間根據(jù)流動相體積調(diào)整，一般10-20分鐘。對于混合流動相，建議先分別脫氣再混合，減少混合后氣泡再次析出。
注意事項：超聲脫氣后需靜置5-10分鐘，待殘留微小氣泡上浮；避免長時間超聲導(dǎo)致流動相組分揮發(fā)，尤其是易揮發(fā)性有機(jī)溶劑（如甲醇、乙腈）；含鹽流動相超聲時需注意密封，防止水分蒸發(fā)導(dǎo)致濃度變化。該方法適合樣品前處理及流動相批量脫氣，脫氣效果有限，無法去除溶解態(tài)微量氣體。
（二）真空脫氣法
真空脫氣法通過降低體系壓力，使流動相中溶解的氣體達(dá)到過飽和狀態(tài)并析出，再通過真空泵將氣體抽出，脫氣效率優(yōu)于超聲脫氣，可分為離線真空脫氣和在線真空脫氣。
離線真空脫氣操作：將流動相置于真空干燥器中，連接真空泵，控制真空度在0.08-0.1MPa，脫氣15-30分鐘，期間定期搖晃容器，促進(jìn)氣泡釋放。該方法適合高粘度流動相及對超聲敏感的樣品體系，但操作耗時，且脫氣后需快速轉(zhuǎn)移至儀器儲液瓶，避免再次吸潮進(jìn)氣。
在線真空脫氣是主流的儀器集成脫氣方式，通過儀器內(nèi)置的真空脫氣裝置，實(shí)時對流動相進(jìn)行脫氣。脫氣裝置通常由脫氣膜、真空泵組成，流動相流經(jīng)多孔性脫氣膜時，膜一側(cè)為流動相，另一側(cè)為真空環(huán)境，氣體通過膜擴(kuò)散被抽出。在線真空脫氣可實(shí)現(xiàn)連續(xù)脫氣，適配梯度洗脫，能有效避免分析過程中氣泡產(chǎn)生，是高精度分析的方法。操作時需定期檢查脫氣膜完整性，防止膜破損導(dǎo)致流動相泄漏。
（三）氦氣脫氣法
氦氣脫氣法屬于惰性氣體吹掃脫氣，原理是利用氦氣在流動相中溶解度極低的特性，通入氦氣置換出溶解的空氣，可去除99%以上的溶解氣體。
操作步驟：將氦氣鋼瓶通過減壓閥連接至流動相儲液瓶，調(diào)節(jié)氦氣流量為1-3mL/min，使氦氣以微小氣泡形式通入流動相底部，吹掃10-15分鐘后，保持輕微正壓繼續(xù)通氣，維持脫氣效果。該方法適合梯度洗脫、低波長檢測及對基線穩(wěn)定性要求的分析場景，如氨基酸分析、痕量雜質(zhì)檢測。
注意事項：氦氣為惰性氣體，成本較高，需合理控制流量；通氣時避免氣泡劇烈攪動流動相，防止組分混合不均；鋼瓶使用需符合安全規(guī)范，定期檢查管路密封性。
（四）加熱脫氣法
加熱脫氣法利用氣體溶解度隨溫度升高而降低的規(guī)律，通過加熱流動相促進(jìn)氣體析出。操作時將流動相加熱至40-60℃，保溫10-20分鐘，同時攪拌或通入少量惰性氣體，加速氣泡逸出，冷卻至室溫后使用。
該方法適合對熱穩(wěn)定的流動相，脫氣效率較高，但需注意避免流動相組分揮發(fā)、分解，或含鹽流動相結(jié)晶析出。加熱后需充分冷卻，防止高溫流動相對色譜柱、檢測器造成損壞，一般僅用于特殊體系的輔助脫氣。
三、系統(tǒng)內(nèi)氣泡的排除技巧
若脫氣導(dǎo)致氣泡進(jìn)入儀器管路，需及時排除，避免影響分析。對于泵體氣泡，可關(guān)閉檢測器，開啟泵以2-5mL/min的流速沖洗管路，同時打開泵排氣閥，直至排氣口流出無氣泡的流動相；對于進(jìn)樣器氣泡，可反復(fù)推拉進(jìn)樣針，排出殘留空氣，或用流動相沖洗進(jìn)樣通道；對于色譜柱及檢測器管路氣泡，可提高流速沖洗，必要時反向沖洗色譜柱（需確認(rèn)色譜柱可反向使用）。
四、脫氣方法的選擇與優(yōu)化
實(shí)際應(yīng)用中需根據(jù)分析需求、流動相性質(zhì)及儀器配置選擇合適的脫氣方法：常規(guī)定性分析可采用超聲脫氣；批量樣品前處理適合離線真空脫氣；高精度定量分析、梯度洗脫優(yōu)先選用在線真空脫氣或氦氣脫氣；熱穩(wěn)定流動相可搭配加熱脫氣輔助。此外，可通過組合脫氣提高效果，如超聲脫氣后再進(jìn)行在線真空脫氣，兼顧成本與效率。
同時，需做好預(yù)防措施：流動相制備后及時脫氣，儲液瓶密封保存，減少與空氣接觸；定期檢查儀器管路、接頭、密封件，避免泄漏進(jìn)氣；分析前用脫氣后的流動相充分沖洗系統(tǒng)，排除殘留氣泡。
五、結(jié)語
氣泡問題是HPLC分析中不可忽視的干擾因素，脫氣處理的有效性直接決定檢測結(jié)果的可靠性。不同脫氣方法各有優(yōu)劣，需結(jié)合實(shí)際場景合理選擇，同時注重操作規(guī)范與系統(tǒng)維護(hù)。通過科學(xué)的脫氣流程與氣泡排除技巧，可有效避免基線波動、峰形異常等問題，保障液相色譜分析儀穩(wěn)定運(yùn)行，提高分析數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性與重復(fù)性。在實(shí)際工作中，還需根據(jù)流動相組成、儀器性能不斷優(yōu)化脫氣參數(shù)，適配不同分析需求。
